كلية الطب البيطري / جامعة القادسية تناقش رسالة ماجستير للطالبة لبنى عبد الرحيم شتيوي

نوقشت في كلية الطب البيطري / جامعة القادسية رسالة ماجستير بعنوان : العزل والتشخيص الجزيئي لجرثومة اشيريشيا القولون المرضية المعدية في الدجاج البياض .

Isolation and Molecular Identification of Pathogenic Escherichia .Coli  in     Broiler chicks

اسم المشرف: نافع صبيح جاسم

الخلاصة والنتائج :

     اجريت  الدراسة الحالية لغرض الكشف عن الاشريكيا القلونية الممرضة من داء العصيات القولونية في الدواجن وتأكيد ذلك بتقنية تفاعل سلسلة البلمرة باستخدام برايمر نوعي . تم جمع 200 مسحة من افراخ تتراوح اعمارهم (3 -14) يوم  من امعاء طيور مصابة ووضعت في المرق المغذي المعقم . تم عزل 103 عزلة من جرثومة الاشريكيا القولونية وشخصت بوساطة الطرق التقليدية وكانت الآفات المرضية للرئة والتي كشفت انها كانت محتقنه ومتصلبة بينما الامعاء اظهرت احتقان في الاثني عشري مخاط غزير في السطح البطاني للأمعاء . هدفت الدراسة الحالية لعزل وتوصيف جرثومة الاشريشيا القولونية باستخدام تقنية الزرع على الاطباق الزرعية وتقدير معدل انتشار الجرثومة في مختلف المناطق من محافظة الديوانية ، ومعدل انتشارها خلال اشهر السنة وتقدير نسبة عزلها من الاعضاء المختلفة والتشخيص للجرثومة كما شملت الدراسة تحديد الحساسية للمضادات الحيوية الشائعة الاستخدام في علاج اصابات الدواجن. تم جمع العينات تحت ظروف معقمة وجمعت معلومات خاصة اخذت من المربين حول قاعات تربية الدواجن وعدد الحالات المسجلة ، التاريخ ، اسم المربي ، موقع الحقول ، العمر ، نوع الطيور ، عدد الهلاكات ، التلقيح ، الاصابات والعلاجات السابقة ، العلامات السريرية ، التشخيص السريري ، اختبار الحساسية للمضادات الحيوية . خلال الفترة المحصورة من تموز / 2015 لغاية تشرين الثاني / 2015 تم جمع 200 عينة من طيور مريضة كانت تعاني من التهاب السرة وعينات من التهاب الكيس الهوائي ، الكلية  ، الكبد والقناة الهضمية . تم عزل 103 عزلة تقع في ثلاث انواع ممرضة من جرثومة الاشريكيا القولونية الممرضة و100 انواع اخرى من الاشريكيا القولونية . هذه العزلات شخصت وثبتت كعزلات اشريشيا قولونية مسببه للإسهال من خلال اجراءات متعددة الخطوات .اولا بالاعتماد على  الصور الشكلية للعزلات المفحوصة على اطباق الماكونكي والتي بي اكس وكشفت انتمائها الى عائلة الانتريوبكترياسي وخصوصا الاشريشيا القولونية . ثانيا بالاعتماد على الاختبارات البايوكيميائية للعزلات المفحوصة المشتقة من الابي 20 وظهر ان هذه العزلة تعود الى الاشريكيا القولونية . اظهرت نتائج فحص الابي 20 الرقم المظهري  (55445723) كتشخيص تأكيدي لعزلات الاشريشيا القولونية . الشفرة التي كانت متوافقة بصورة جيدة مع الاشريشيا القولونية طبقا الى دليل الشركة المصنعة. مفتاح التحقق قاد إلى تعيين السلالة البكتيرية من السعي على مستوى الجنس فقط. هذا بدوره تناولت الحاجة لتحديد سلالة بكتيرية من البحث على مستوى الأنواع من خلال النهج الجزيئي بوساطة  16 S  r dNA sequencing  كشف التضخيم الناجح من الطول الكامل (1500 بب) من الجين rDNA  16S. النتائج اوضحت عند التحري بوساطة الترحيل الكهربائي على 1% هلام اكاروز  والتعرض لضوء الأشعة فوق البنفسجية التي ظهرت الحمض النووي كحزم مدمجة. ثلاثة . كشفت النتائج عن التضخيم الناجح لجزء من  bp248 تنتمي إلى جين eae. ومع ذلك، فإن التفاعلات بوساطة البرايمرات الاخرى لم تنتج من اي  PCR ناجحة. و نتائج بلاستن نستنتج  أن تسلسل الاستعلام لديه تشابه 99٪ وتغطية الاستعلام  99٪ مع القيمة الإلكترونية من 8e-107 إلى الجين 16 S rDNA للاشريكيا القولونية. أكدت جميع البيانات التي تم الحصول عليها المذكورة في أعلاه أن سلالة المختبرة هي  الاشريكيا القولونية.

التوصيات    

1-الدراسة الوبائية المكثفة لجرثومه ال أي كولاي في العراق .

2-استحدام انواع مختلفة من العلاجات لتبين مقاومه وحساسيه البكتريا المرضية.

3- تعتبر البكتريا من الامراض المشتركة بين الانسان والطيور .

الخلاصة والنتائج :

تضمنت الدراسة الحالية  جمع 150 عينة سريريه تم الحصول عليها من مربي الدجاج في مدينة الحلة خلال مدة ثلاث اشهر للفترة الممتدة من تشرين الاول 2015 لغاية كانون الثاني 2016 .

تم عزل وتحديد أنواع جنس السالمونيلا وذلك بالاعتماد على الزرع الجرثومي على الأوساط الانتقائية بالإضافة إلى الاختبارات البايوكيميائية باستخدام عدة الابي ApI20E وكذلك اعتمادا على الأنماط المصلية أحادية التكافؤ وأمصال مضادة أحادية التكافؤ والمطابقة باستخدام تقنية تفاعل السلسلة المتبلمرة التقليدي والتسلسل الجيني ، وتسجيل هذا التسلسل في بنك الجينات NCBI لغرض الحصول على أرقام الانضمام للشجرة الوراثية .

كما تضمنت الدراسة اختبار حساسية عزلات السالمونيلا ضد بعض المضادات الحيوية في المختبر واظهرت النتائج ان عزلات السالمونيلا اظهرت مقاومة 100% لكل من الاموكسسلين ، الجنتامايسين والنايتروفيورانتون و 9،09% للسيفوتاكسيم و 45،45% كانت مقاومة للترايموكسازول و 36،36% للترايمثوبريم، الاوكسيتتراسايكلين والتوبرامايسين و 18،18% للكلورامفينكول و 27،27% للسبروفلوكساسين.

 تضمنت الدراسة ايضا الكشف عن بعض عوامل الضراوة بوساطة تقنية تفاعل السلسلة المتبلمرة التقليدي وتم تحديد جينات ompC ، invA ، hila ، gryB 16s RNA . احدعشر رقم تسلسلي تم الحصول عليه من خلال تسجيل ارقام احدى عشر تسلسل جيني لل 16srRNA في  بنك الجينات NCBI. جين 16srRNA يحمل الارقام التسلسلية KX665566.1: 473, : KX687342.1: 464, : KX695186.1: 473, KX695195.1 :473, KX695184.1 :473, KX695196.1:473, KX695180.1 :473 , and KX695181. 1:473,KX695185. 1:473, KX695182. 1:473 and KX695183. 1:473شجرة العلاقة الوراثية للجين 16s RNA ، اظهرت وجود علاقة اختلاف بين العزلات المحلية و العالمية للشجرة الوراثية للجين16s RNAوذلك بتطبيق برنامج CLC sequence viewer 6.8 

     أظهرت نتائج الدراسة النسيجية المرضية تضخم الكبد ، احتقان في الوريد المركزي مع وجود نزيف في الأنسجة الكبدية والطحال. كما تم تسجيل وجود تنخر شديد في الخلايا اللمفاوية مع نضوب كامل في اللب الأبيض وتكاثر في اللب الأحمر ، التهاب الأمعاء ألنزفي ، التهاب الاثنى عشري والأعور مع اتشاح كثيف للخلايا الالتهابية .

 التوصيات

1. بالرغم من هذه الدراسة يتطلب البحث عن عترات أخرى من بكتريا السالمونيلا خصوصا غير المتحركة منها
2. يجب الاعتماد على تقنية البي سي ار في تحديد وعزل بكتريا السالمونيلا.
3. الاختبارات المتعددة لنماذج الدواجن البيئية يجب ان تأخذ بطريقة صحيحة للسيطرة على الإصابة بالسالمونيلا في صناعة الدواجن .
4. من الممكن استعمال جين ال gyrB كدليل لعزل الإصابة في السالمونيلا.
5. من الممكن تحديد السالمونيلا مباشرة بواسطة استعمال التقنيات الجزيئية .
6. فهم وبائية السالمونيلا بالدواجن مؤثر في منع الإصابة وممارسة الرقابة لتقليل عترات الامراضية المشتركة وحدوث الإصابة في الإنسان .

اسم الطالب : لبنى عبد الرحيم شتوي  ، بإشراف: ا.م. د. نافع صبيح جاسم

حيث جرت المناقشة على قاعة الدكتور جواد ألعبيدي ، وقد حصلت الباحثة على تقدير امتياز من قبل رئيس وأعضاء لجنة المناقشة .