برعاية الاستاذ الدكتور كاظم جبر الجبوري رئيس جامعة القادسية وبإشراف الاستاذ الدكتور منير عبد اﻻمير عبد الفتلاوي عميد كلية الطب البيطري أقام فرع الامراض وامراض الدواجن في الكلية دورة تدريبية عن تقنية لطخة ويسترنWestern blotting technique
حاضر الدورة : أ م د اسراء نجم عبدالله العبادي / أ. محاسن عبد الرزاق خضير
تهدف الدورة الى : تدريب المشاركين على تقنية الويسترن بلوت تُعَد تقنية ويسترن بلوت تقنية مهمة تستخدم في علم الأحياء الخلوي والجزيئي. وباستخدام تقنية ويسترن بلوت، يتمكن الباحثون من تحديد بروتينات معينة من خليط معقد من البروتينات المستخرجة من الخلايا. وتستخدم هذه التقنية ثلاثة عناصر لإنجاز هذه المهمة: (1) الفصل حسب الحجم، (2) النقل إلى دعامة صلبة، و(3) وضع علامة على البروتين المستهدف باستخدام أجسام مضادة أولية وثانوية مناسبة لتوضيحها.
تضمنت الدورة : تُعَد تقنية ويسترن بلوت تقنية مفيدة للغاية في الكشف عن البروتينات، حيث تسمح للمستخدم بقياس كمية التعبير البروتيني أيضًا. تناولت هذه الورقة البروتوكول والنظرية وراء هذا البروتوكول وبعض تقنيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها. يمكن اعتبار تقنية ويسترن بلوت بمثابة توازن معقد، حيث يحاول الباحث الحصول على إشارة غير محددة ولكنها قوية.
تُستخدم تقنية ويسترن بلوت غالبًا في الأبحاث لفصل البروتينات وتحديدها. وفي هذه التقنية يتم فصل خليط من البروتينات على أساس الوزن الجزيئي، وبالتالي حسب النوع، من خلال الرحلان الكهربائي للهلام. ثم يتم نقل هذه النتائج إلى غشاء ينتج شريطًا لكل بروتين. ثم يتم تحضين الغشاء بعلامات أجسام مضادة خاصة بالبروتين المطلوب.
يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بحيث لا يتبقى سوى الأجسام المضادة المرتبطة بالبروتين المطلوب. ثم يتم الكشف عن الأجسام المضادة المرتبطة عن طريق تطوير الفيلم. نظرًا لأن الأجسام المضادة ترتبط فقط بالبروتين المطلوب، فيجب أن يكون شريط واحد فقط مرئيًا. يتوافق سمك الشريط مع كمية البروتين الموجودة؛ وبالتالي فإن القيام بمعيار يمكن أن يشير إلى كمية البروتين الموجودة. ستصف الورقة أولاً بروتوكول النقل الغربي، مصحوبًا بصور لمساعدة القارئ والنظرية على ترشيد البروتوكول. سيتبع ذلك شرح نظري للإجراء، وفي القسم اللاحق، نصائح استكشاف الأخطاء وإصلاحها للمشاكل الشائعة.
التوصيات : إحدى اختيارات الكشف على فيروس نقص المناعة البشرية توظف لطخة ويسترن لاكتشاف الجسم المضاد للفيروس فيروس العوز المناعي البشري في عينة مصل الإنسان. بروتينات من خلايا معروفة الإصابة بفيروس HIV يتم فصلها وبقعها على غشاء . ثم، يتم تجربة المصل بصورة جسم مضاد أولي؛ ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير الملتصقة، ويتم وضع جسم مضاد ثانوي ضد-بشري مرتبط بإنزيم الإشارة. الحزم المصبوغة تدل على البروتينات التي تتعرف عليها الأجسام المضادة في مصل المريض.
يتم أيضاً استخدام لطخة ويسترن كاختيار مؤكد لمرض جنون البقر (Bovine spongiform encephalopathy (BSE.
يتم استخدام لطخة ويسترن لاختيار بعض أنواع مرض لايم Lyme disease (الذي هو التهاب بكتيري)
على الرغم من أن إجراء اختبار ويسترن بلوت بسيط، إلا أن العديد من المشاكل قد تنشأ، مما يؤدي إلى نتائج غير متوقعة. يمكن تصنيف المشكلة إلى خمس فئات: (1) نطاقات غير عادية أو غير متوقعة، (2) عدم وجود نطاقات، (3) نطاقات خافتة أو إشارة ضعيفة، (4) خلفية عالية على الاختبار، و(5) بقع غير متساوية أو غير متساوية على الاختبار.
